样品前处理之样品的采集、保存

　　假如说有天你正在构建实验室需要的遗传材料，刚刚完成了一些纯化插入片段，PCR产物，和半成品质粒，这时候突然有事需要你去处理，你只好赶紧把这些东西放到-20℃的冰箱里，但是却忘了在笔记本上记录下它们的位置。之后你的同事想要继续完成这项工作，但他们不知道到哪里去找样品，你一时半会也回不来，那怎么办？

这种情况也许在每个实验室中不可避免，就算是进行了细致的文档记录，但是项目一旦完成，也许就不会再有人记起这些样品了。

The Scientist杂志近期汇总了一下专家的意见，看看他们的实验室是如何保存样品的？

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第一个例子：来自波士顿儿童医院的George Daley实验室

　　George Daley教授是干细胞领域的著名学者，多年来从事多能干细胞维持全能性的分子机制研究，在多能干细胞向造血细胞分化等领域都作出了重要贡献，其实验室是最早建立人iPS细胞及病人来源iPS细胞的实验室之一，Daley教授也曾于2007年担任国际干细胞学会的主席。

主要问题：

　　Daley教授实验室在同一时期有20～40名实验室工作人员同时工作，他们都需要用到三台-80℃冰箱和两个液氮罐，这会导致产生大量需要保存的试管，容易丢失或错位。

解决方案：

　　经过多年的实验研究，Daley实验室出现了无数需要保存的细胞株和试剂。2007年，实验室管理员Beth Kaleta加入他们实验室，当时寻找样品的唯一方法就是在一个留有各种涂鸦，“鬼画符”的活页夹上寻找试剂样品的踪迹。

为此Kaleta构建了一个Excel 电子表格来追踪出处，比如说她记录下A质粒位于冰箱3层、2排、第四个盒子的D2位置，从此之后每一位研究者都这样保存他们的样品。“这个编撰目录并不容易，因为有时样品并不能与实验室笔记相匹配，所以我们也在考虑加上条形码。”

　　实验室里的每位博士后都至少有一个液氮罐架子（5个盒子，每个盒子有81个样品），以及超低温冰箱中的架子（16个盒子）。在实验室中，研究人员自己负责自己的材料，但是一旦这位研究人员不在，那么“我们就无法知道他盒子里留下了什么”，Kaleta说。

　　每当有人离开实验室，Kaleta就会与另外一位资深研究员，和这个要离开的研究人员进行交接，确保关键的试剂和细胞株不会丢失。她表示，关键的细胞株会被送到哈佛干细胞研究所核心实验室中进行扩增和保存，重要的质粒也会被保存，并转移到Addgene，这是一个非盈利性质的生物试剂存储库和分配库，目前已有75个Daley实验室的质粒可以提供给全球2,000个实验室使用。

一般来说，Daley实验室自己只会保存两小瓶，“这样就能腾出许多空间来，”Kaleta说。

　　从笔记本到电子表格，Kaleta进一步完善了实验室的保存样品管理，但是依然还是会出现无法识别的样品，她说，像之前有位博士后，他设计了多个iPSC细胞系，并用一个只有他自己知道的密码方法进行命名，现在自己却忘了。

一．样品采集的目的

1.掌握食品卫生质量

2.掌握或查明生产经营过程卫生问题

3.特殊需要：食物中毒、食品污染等

4.为制定或修订食品卫生标准

5.为食品新资源进行卫生学评价

二．样品采集的原则

1.要有代表性

2.要有典型性

3.要有适时性

4.要有程序性

三．样品的分类

（一）客观样品

出厂前的样品检验的样品

为办理卫生许可证或生产许可证的检验的样品

为开发利用新食品资源或新资源食品的样品

为制定或修订食品卫生标准的样品

其它需要的样品

（二）选择样品

可疑不合格的食品或食品原料

可疑不合格的食品容器、用具、包装材料、餐具、运输工具等

发生食物中毒的可疑食物，病人的呕吐排泄物、血液等

超过保质期限的食品或原料

为仲裁需检验的食品

四．采样工具和容器

（一）采样工具

常用工具：镊子、刀子、螺丝刀、酒精灯、胶布、笔、采样记录等。

特殊工具：长柄勺、采样铲、玻璃或金属管采样器、金属探管和探子等。

（二）采样容器

清洁干燥、内壁光滑、不含待测或干扰物质

容器和盖（塞）不影响样品气味、pH及食物成分

酒类、油性不应用橡胶瓶塞

酸性食品不宜用金属容器

测农药的样品不宜用塑料容器

五.采样的技术要求

1.一般常规

2.无菌操作采样

3.采样的数量

4.不同样品的采集

5.食物中毒样品的采集

（一）一般常规

1.现场采样记录

被采样单位

样品名称

采样地点

样品产地

商标

数量

生产日期

批号或编号

样品状态

包装类型及规格

感官（破损、霉变、生虫等）

采样方式

采样的目的

现场环境条件（温度、湿度、卫生状况）

采样机构（盖章）

采样人（签字）

采样日期

被采样单位负责人签字

2.样品签封和编号

样品采集完毕后，应对每件样品贴上标签，进行编号。明确标记品名、数量、采样地点、来源、采样人、、采样日期等内容。采样容器盖接处或包装上进行签封，签封可有采样人或采样单位进行。

注意事项：样品编号与送检单应相符；样品编号与检品编号是两个不同概念。

3.填写采样收据

与采样记录内容基本相同。主要用于被采样单位入账，目前暂由采样记录代替。

4.样品检测申请书填表说明

被检单位：指对检品负责任的单位，应填全称。

保质期限：指检品包装注明的保质期。

采样地点：指检品抽取的地方，如仓库、生产线、售货地点等。

其他情况：指需要说明的情况。如多个检品采样编号说明等。

检测项目：根据国家标准，指定检测项目，特殊情况除外。

检测目的：申请办证，日常检测，质控，仲裁，结果确认，突发事件，其他。

检测类别：定期监测；不定期监测：抽检，委托，复核，质考，突发事件，其他。

（二）无菌操作采样

1.采样用具、容器灭菌处理

高压灭菌、酒精灯火焰燃烧灭菌

2.无菌操作步骤

a.采样前，用75%酒精棉球擦手

b.固体、半固体、粉末用灭菌小匙或勺采样，

液体用玻璃吸管取样，装入容器，采样容器在

火焰下燃烧瓶口加盖封口。

c.散装液体采样前，需混匀，出口处表面消毒，

消毒可用75%酒精或火焰燃烧，装入容器，采样容器在

火焰下燃烧瓶口加盖封口。

d.餐饮具、容器、设备可用灭菌小刀刮下污物或灭菌棉

试子抹擦表面，将棉试子抹擦的一端对准采样容器瓶

口剪下或将抹擦的棉试子手拿的一端在火焰下燃烧，

放入容器中，容器封口同上。

3.无菌采样的注意事项

尽量从未开封的包装内取样，大包装要从各部分采取由代表性的样品。

预先消毒的采样工具和容器，在采样时打开，防止污染。

采样最好是两人操作，一人取样，一人协助打开采样瓶、包装和封口。

为了解生产过程卫生状况，可在各工序分别采样。工作人员手指采样，可用消毒棉试子涂擦，放入灭菌增菌液或生理盐水中，进行细菌培养，证明污染程度。

要在采样后四小时内送检验室。气温高时，用保温容器中，温度保持4~10℃为宜。

（三）不同样品的采集要求

（四）采样数量

1.原则：

根据检验项目和项目而定。每份样品一般不少于检验需要量的三倍，供检验、复检和留样。

2.理化检验项目采样数量：

固体样品不少于500g。

液体、半液体500mL～1000mL。

3.微生物检验采样数量

（五）食物中毒样品的采集

剩余食物

病人呕吐物、排泄物及洗胃液

炊具、容器

病人的血液或尿液

带菌者检验的样品

尸体解剖标本

食品原料、半成品及成品

1.采取剩余食物的要求

最好为餐桌上剩余食物

必须无菌操作

用无菌盐水冲洗容器或用无菌棉试子涂抹，放入灭菌容器。

体积较大肉食或鱼类等，可表面消毒取内部样品，放入灭菌容器。

2.病人呕吐物、排泄物及洗胃液地采集

新鲜

避免交叉污染

治疗后可不取样

细菌性食物中毒可做肛门试子

3.炊具、容器

棉试子沾生理盐水反复涂擦

菜板可用刀刮其表面后放入无菌容器

抹布可用灭菌剪刀剪下一块，放入灭菌生理盐水的容器

4.病人的血液或尿液的采集

怀疑细菌性食物中毒发病初期采血直接培养病原体。便于观察血液、排泄物、食物三者中分离菌株；用病人血清作凝集试验。

怀疑化学性食物中毒应采病人的尿液进行检验

5.带菌者检验的样品

粪便

鼻腔分泌物

疮痂脓液

6.尸体解剖标本

胃肠内容物

脏器

肠系膜淋巴结

血液

7.食品原料、半成品及成品

按加工、生产过程系统采样。

注意无菌操作

食物中毒采样的注意事项

数量比日常采样量要大

无菌操作：防止交叉污染

要及时、准确、有代表性

手续完备

检验目的明确、重点突出

可先做定型，再做定量

六.样品的保存

样品保存的原则

1.要保持样品原来的状态

2.易变质的样品要冷藏

3.特殊样品要在现场作相应处理

（1）霉变：

可放在1%甲醛或3%福尔马林溶液，也可放在5%乙醇或稀乙酸溶液中。

（2）昆虫检验：

应用乙醚或氯仿棉球熏蒸。

（3）挥发毒物：

可加碱固定后保存。